B27無血清培養(yǎng)基的使用展現(xiàn)了一種重要的培養(yǎng)方法：允許細(xì)胞培養(yǎng)

在一套限定條件下進(jìn)行，盡可能避免受到干擾參數(shù)的影響。

 

細(xì)胞適應(yīng)B27無血清培養(yǎng)基的方法

1.直接適應(yīng)——細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到B27無血清培養(yǎng)基中。

一些類型細(xì)胞可直接從包含血清的培養(yǎng)基適應(yīng)B27無血清培養(yǎng)基。對(duì)于直接適應(yīng)，接種細(xì)胞密度應(yīng)該:2.5×105~3.5×105細(xì)胞/ml。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106~3×106細(xì)胞/ml時(shí)，傳代培養(yǎng)細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞密度在培養(yǎng)4到7天后達(dá)到2×106~4×106細(xì)胞/ml時(shí)，細(xì)胞*適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基。每隔3~5天，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106~3×106細(xì)胞/ml，細(xì)胞活率在90％時(shí)，貯備的適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。

2.連續(xù)適應(yīng)——分好幾步把細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到B27無血清培養(yǎng)基中，與直接適應(yīng)相比較，連續(xù)適應(yīng)趨向?qū)τ诩?xì)胞更加溫和一些。

（1）以2倍正常接種密度接種生長活躍的細(xì)胞培養(yǎng)物到80%有血清培養(yǎng)基：30％sfm混合培養(yǎng)基中，傳代培養(yǎng)。

（2）當(dāng)細(xì)胞密度>5×105細(xì)胞/ml時(shí)，以2×105到3×105細(xì)胞/ml細(xì)胞密度，在有血清培養(yǎng)基：sfm為50∶50的混合培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。

（3）以2×106到3×106細(xì)胞/ml細(xì)胞密度，25％有血清培養(yǎng)基和75%sfm中傳代培養(yǎng)。

（4）當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106到3×106細(xì)胞/ml（接種后4到6天），在100％sfm培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。

（5）每隔3到5天，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106到3×106細(xì)胞/ml，細(xì)胞活率在90％時(shí)，貯備的適應(yīng)了B27無血清培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。